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內毒素與鱟試劑的反應原理

發(fā)布時間: 2022-08-04  點擊次數(shù): 1341次

系海產動物生物學分類上屬節(jié)肢動物門肢口綱劍尾目。在其血液中含有一種特殊的變形細胞amoebocyte。這種變形細胞中含有能被內毒素激活的C因子、B因子、前凝固蛋白,因此,內毒素檢測LT鱟變形細胞溶解物試驗的機理即是內毒素通過激活C因子、B因子、前凝固酶,而使可凝固蛋白變成凝固蛋白肉眼可見的凝膠),從而可以半定量及定量地知內毒素的含量(圖1。



日本學者在對可凝固蛋白氨基酸順序研究的基礎上發(fā)現(xiàn)內毒素激活的凝固酶的作用點為可凝固蛋白的第18Arg19Ghr間的肽健,以及第46Arg47 G1y間的肽鍵,而裂解為A鏈、B鏈及C肽。且在切斷部位的羧基端氨基酸的結構均為-G1y-Arg提出此酶的作用有特異性2。產色基質內毒素檢測法即是據(jù)此原理而設計的。



一般地講,內毒素與試劑的反應是非常特異的,因此,LT法的假陽性極少。從革法蘭氏陽性菌分離出的肽聚糖雖亦能凝固鱟試劑但其活性比內毒素低1000~ 400000倍。


近來發(fā)現(xiàn)一種新的合成抗癌劑羧甲基13-β-D-葡聚糖亦能與鱟試劑起反應。其反應原理是:鱟試劑中含有一種稱為G因子的物質,此抗癌劑能激活試劑中的G因子而活化的G因子又依次激活前凝固酶、可凝固蛋白,從而形成凝膠2。至此凝血酶、凝血激酶,Poly I:CPo1yA:U、核糖核酸酶、胰蛋白酶等,亦可凝固鱟試劑而引起假陽反應。但用氯仿處理此等物質(浸取34小時可以除去這些物質,從而可避免發(fā)生假陽性反應。


哺乳類動物血漿中含一種酯酶,它對內毒素有降解及脫毒的作用,故用LT法檢測血漿中的內毒素易受此種物質的影響而造成假陰性結果。為了避免此等因素的影響在試驗前血漿需經過特殊處理。目前共有下述四種方法處理血漿,即稀釋加熱法、酸化值液、氯仿浸取法及凝膠過濾法。我們及其它的一些工作者認為稀釋加熱法簡便易行,效果較好。


血液中還有一種稱之為抗LPS因子Anti - LPS - factor,ALF的蛋白物質分子量約為15KDa,為一種血抗凝劑,LPS介導的LT反應有直接的抑制作用。ALF可抑制LPSLT反應的初始.階段。因此在制備試劑時,應將此物質清除。氯仿浸取法可有效去ALF。除去ALF及加入Ca++ o.o2M可改善試劑的質量提高敏感性約100倍。

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